INSTITUTO NACIONAL DE VITIVINICULTURA

INSTITUTO NACIONAL DE VITIVINICULTURA
Resolución C. 24/2003
Oficialízase el Método de Determinación de la Relación Isotópica 18O/16O del Agua Contenida en los Vinos. Validación del mencionado método.
Mendoza., 19/8/2003
VISTO el Expediente N° 311-000406-2003-7, y
CONSIDERANDO:
Que por citado expediente se tramita la Oficialización del Método de Determinación de Relaciones Isotópicas del Oxígeno en el Agua de los Vinos por Espectrometría de Masas.
Que dicha determinación posibilita el control de la autenticidad de vinos y mostos a través del valor de la relación isotópica de los isótopos estables del oxígeno, ¹⁸O/¹⁶O, efectuada sobre el agua del vino, mediante un equipo Espectrómetro de Masas de Relaciones Isotópicas de Isótopos Estables (IRMS).
Que el factor responsable de dicha relación es el fraccionamiento isotópico que se produce en los procesos de asimilación y evapotranspiración del agua en la planta.
Que desde 1996 esta determinación es la base del Método Oficial de la OFICINA INTERNACIONAL DE LA VIÑA Y EL VINO (O.I.V.) para establecer el origen del agua de los vinos.
Que la REPUBLICA ARGENTINA es país miembro de la O.I.V., representación ejercida por el INSTITUTO NACIONAL VITIVINICULTURA, y ha participado en la aprobación de este Método
Que desde el momento de su aprobación, de acuerdo al Reglamento CEE N° 822/87, es un método aplicable en los estados miembros de la Unión Europea.
Que este método ha sido validado con la participación de Organismos de reconocido prestigio internacional y dicha validación ha sido publicada conjuntamente con el Método en el Boletín de Ia O.I.V. Vol. 70 - Enero-Febrero 1997, pág. 45-65.
Que este método permite detectar si un vino o mosto ha sido adicionado de agua exógena y evaluar su grado de adición.
Que esta determinación tiene el respaldo científico suficiente como para adoptarse como norma de control oficial por el INSTITUTO NACIONAL DE VITIVINICULTURA.
Por ello, y en uso de las facultades conferidas por la Ley N° 14.878 y los Decretos Nros. 1279/ 03 y 1280/03,
EL PRESIDENTE DEL INSTITUTO NACIONAL DE VITIVINICULTURA
RESUELVE:
1° — Oficializar el METODO DE DETERMINACION DE LA RELACION ISOTOPICA ¹⁸O/¹⁶O DEL AGUA CONTENIDA EN LOS VINOS que, junto a su VALIDACION, obran como Anexo a la presente resolución, en sus versiones en idioma español.
2° — Regístrese, comuníquese, dése a la Dirección Nacional del Registro Oficial para su publicación y cumplido, archívese. — Enrique L. Thomas.
ANEXO A LA RESOLUCION N° C.24/03
METODO DE DETERMINACION DE LA RELACION ISOTOPICA 18O/16O DEL AGUA CONTENIDA EN LOS VINOS
DESCRIPCION DEL METODO
1. Objetivo del método
El objetivo del método es medir la relación isotópica ¹⁸O/¹⁶O del agua de diferentes orígenes. La relación isotópica ¹⁸O/¹⁶O puede ser expresada como la desviación ‰ con relación al valor de la relación isotópica de la referencia Internacional V.SMOW:

2. Principio
La relación isotópica ¹⁸O/¹⁶O es determinada por espectrometría de masa de relaciones isotópicas (IRMS) a partir de las corrientes iónicas m/z 46 (¹²C¹⁶O¹⁸O) y m/z 44 (¹²C¹⁶O2) producidas por el dióxido de carbono obtenido luego del intercambio con el agua del vino según la reacción:
C¹⁶O2 + H2 ¹⁸O ó C¹⁶O¹⁸O + H2 ¹⁶O
El dióxido de carbono de la fase gaseosa se utiliza para el análisis.
3. Reactivos
— Dióxido de carbono para análisis.
— SMOW (Standard Mean Ocean Water).
— GISP (Greenland lce Sheet Precipitation).
— SLAP (Standard Light Arctic Precipitation).
— Agua de referencia propia del laboratorio, cuidadosamente contrastada con relación a la muestra de referencia de la International Agency of Atomic Energy in Vienna (IAEA).
4. Equipamiento de laboratorio
— Espectrómetro de masa de relaciones isotópicas con una repetibilidad interna de 0,05‰.
— Triple colector para registro simultáneo de iones m/z 44, 45 y 46, o en su defecto, doble colector para la medición de los iones m/z 44 y 46.
— Sistema termostatizado (+ 0,5°C) para realizar el equilibrado entre CO2 y el agua del vino.
— Bomba de vacío que pueda alcanzar una presión interna de 0,13 Pa.
— Frascos para muestra con un volumen de 15 ml y un tubo capilar anexo de un diámetro interno del orden de 0,015 mm.
— Pipeta Eppendorf con cono de plástico descartable.
5. Determinaciones experimentales
5.1. Método manual:
a- Procedimiento del método de equilibrado.
— Introducción de la muestra
— Tomar la pipeta Eppendorf de volumen fijo de 1,5 ml, adaptar un cono y pipetear el líquido a analizar para introducirlo en un balón. Luego colocar grasa de siliconas alrededor del cuello del balón y adaptar el balón a la válvula verificando que ésta esté bien cerrada.
— Repetir la operación para cada balón de la batería de trabajo, introduciendo agua de referencia del laboratorio en uno de los balones.
b- Eliminación del gas de la batería:
Se enfrían las dos baterías con nitrógeno líquido, luego abriendo las válvulas, se purga todo el sistema hasta 0,1 mm de Hg.
Se cierran las válvulas y se deja calentar el conjunto. Se repite el ciclo de eliminación de gas hasta que no haya más variación de presión.
c- Equilibrado del agua y del CO2:
Se enfría la batería de trabajo a - 70°C (mezcla de nitrógeno líquido y alcohol) para congelar el agua y se coloca el conjunto al vacío. Luego de estabilizar al vacío, se aísla la batería por medio de una válvula y se purga el sistema por introducción de CO2. Se introduce CO2 gaseoso en la batería de trabajo y luego de haberla aislado del resto del sistema, se introduce la batería en el baño termostatizado a 25°C (± 0,5°C) durante 12 horas (una noche). Para optimizar el tiempo para el equilibrado, se aconseja preparar las muestras al final de la jornada y permitir que se establezca el equilibrio durante la noche.
d- Transferencia del CO2 intercambiado en las celdas de medición
Sobre la línea de vacío, al lado de la batería de trabajo, se adapta un portamuestras que soporta tantas celdas de medición como balones que contengan CO2 intercambiado. Las celdas vacías son cuidadosamente purgadas y los gases intercambiados contenidos en los balones, son sucesivamente transferidos a las celdas de medición, enfriadas con nitrógeno líquido. Luego se dejan calentar las celdas de medición a temperatura ambiente.
5.2. Utilización de un aparato de intercambio automático
Con el fin de realizar el equilibrado, se llenan los frascos de muestras, ya sea con 2 ml de vino o 2 ml de agua (referencia de trabajo del laboratorio), se enfrían a -18°C. Los portamuestras que contienen los productos congelados, son adaptados al sistema de equilibrado y luego de haber realizado el vacío en el sistema, se introduce el dióxido de carbono a una presión de 800 hPa.
El equilibrio se alcanza a una temperatura de 22 ± 0,5°C luego de un período mínimo de 5h y bajo agitación moderada. Dado que la duración del equilibrado depende de la geometría del frasco, la duración óptima debe ser determinada previamente para el sistema utilizado.
El dióxido de carbono contenido en los frascos es luego transferido a la cámara de introducción del espectrómetro de masa por un tubo capilar, y la medición es efectuada según un protocolo apropiado a cada tipo de equipo.
6. Cálculo y expresión de los resultados
La diferencia relativa ’ de la relación de las intensidades de los iones m/z 46 y 44 (I46/I44) entre la muestra y la referencia, es expresada en ‰ por medio de la siguiente relación:

El tenor de 18O de la muestra con relación a la referencia V.SMOW en la escala V.SMOW-SLAP, está dada por la relación:

El valor aceptado para el agua del SLAP es igual a -55,5 ‰ con relación al V.SMOW. La relación isotópica de la referencia debe ser determinada después de cada serie de 10 mediciones con muestras desconocidas.
7. Fidelidad
— la repetibilidad (r) es igual a 0,24 ‰
— la reproducibilidad (R) es igual a 0,50 ‰
VALIDACION DEL METODO DE DETERMINACION DE LA RELACION ISOTOPICA ¹⁸O/¹⁶O DEL AGUA CONTENIDA EN LOS VINOS
ESTUDIO COLABORATIVO INTERLABORATORIOS
1. Participantes
El estudio interlaboratorios ha sido realizado con la participación de 14 laboratorios de Alemania, Francia, Italia, Países Bajos, Reino Unido y Suiza.
2. Muestras
Muestras 1 y 2: agua de canilla local (2 muestras idénticas)

Muestra 3: Vino blanco	A
Muestra 4: Vino tinto	B + 20 % de agua
Muestra 5: Vino tinto	B
Muestra 6: Vino blanco	A + 3 % de agua
Muestra 7: Vino blanco	A + 7 % de agua
Muestra 8: Vino tinto	B + 5 % de agua
Muestra 9: Vino tinto	B + 10 % de agua
Muestra 10: Vino blanco	A + 15 % de agua

3. Cantidad de repeticiones.
Se han realizado tres determinaciones sobre cada muestra.
4. Evaluación estadística de los resultados correspondiente a la norma ISO 5725: 1986.
4.1. Prueba de la varianza máxima.
Se utiliza la prueba de Cochran para determinar si la varianza de las determinaciones de un laboratorio es significativamente mayor que la de los otros laboratorios.
4.2. Prueba sobre el promedio
La prueba de Dixon de dos colas permite verificar si el menor o mayor promedio puede ser considerado como atípico.
5. Resultados
Los resultados están indicados en los cuadros posteriores. Los laboratorios 8, 11 y 12 presentaron valores atípicos y han sido excluidos del cálculo de la repetibilidad r y de la reproducibilidad R.
MUESTRA 1

Lab N°	1	2	3	n		s	s2
1	-8,29	-8,33	-8,36	3	-8,324	0,0356	0,0013
2	-7,96	-7,67	-7,82	3	-7,817	0,1465	0,0215
3	-8,64	-8,24	-8,76	3	-8,546	0,2697	0,0727
4	-8,29	-8,22	-8,30	3	-8,270	0,0436	0,0019
5	-8,27	-8,13	-8,26	3	-8,220	0,0781	0,0061
6	-8,20	-8,21	-8,23	3	-8,213	0,0153	0,0002
7	-8,25	-8,23	-8,30	3	-8,260	0,0361	0,0013
8*	-8,61	-8,47	-8,52	3	-8,531	0,0726	0,0053
9	-8,29	-8,29	-8,31	3	-8,295	0,0103	0,0001
10	-8,35	-8,24	-8,40	3	-8,297	0,0856	0,0073
11 *	-9,12	-9,19	-9,40	3	-9,237	0,1457	0,0212
12 *	-7;64	-7,82	-7,97	3	-7,810	0,1652	0,0273
13	-7,96	-8,06	-7,97	3	-7,999	0,0541	0,0029
14	-8,30	-8,20	-8,30	3	-8,267	0,0577	0,0033

MUESTRA 2

Lab N°	1	2	3	n		s	s2
1	-8,37	-8,33	-8,38	3	-8,359	0,0257	0,0007
2	-7,85	-8,16	-8,08	3	-8,032	0,1600	0,0256
3	-8,29	-7,96	-8,30	3	-8,184	0,1943	0,0378
4	-8,34	-8,30	-8,28	3	-8,307	0,0306	0,0009
5	-8,26	-8,19	-8,22	3	-8,223	0,0351	0,0012
6	-8,34	-8,26	-8,31	3	-8,303	0,0404	0,0016
7	-8,22	-8,29	-8,29	3	-8,267	0,0404	0,0016
8*	-8,35	-8,59	-8,51	3	-8,485	0,1246	0,0155
9	-8,29	-8,30	-8,16	3	-8,252	0,0766	0,0059
10	-8,27	-8,28	-8,03	3	-8,196	0,1412	0,0199
11*	-9,13	-9,31	-9,22	3	-9,233	0,0929	0,0086
12*	-7,57	-7,90	-8,30	3	-7,923	0,3656	0,1336
13	-7,97	-8,07	-7,98	3	-8,002	0,0544	0,0030
14	-8,20	-8,30	-8,30	3	-8,267	0,0577	0,0033

MUESTRA 3

Lab N°	1	2	3	n		s	s2
1	-1,69	-1,61	-1,56	3	-1,622	0,0661	0,0044
2	-1,49	-1,30	-1,51	3	-1,433	0,1175	0,0138
3	-1,78	-1,69	-1,55	3	-1,674	0,1120	0,0125
4	-1,52	-1,49	-1,41	3	-1,473	0,0569	0,0032
5	-1,47	-1,43	-1,48	3	-1,460	0,0265	0,0007
6	-1,33	-1,26	-1,22	3	-1,270	0,0557	0,0031
7	-1,72	-1,76	-1,71	3	-1,730	0,0265	0,0007
8*	-1,98	-1,87	-1,53	3	-1,791	0,2336	0,0546
9	-1,54	-1,54	-1,45	3	-1,510	0,0577	0,0033
10	-1,64	-1,60	-1,60	3	-1,612	0,0269	0,0007
11*	-3,64	-2,74	-3,12	3	-3,167	0,4518	0,2041
12*	-1,50	-1,95	-2,13	3	-1,860	0,3245	0,1053
13	-1,33	-1,40	-1,36	3	-1,362	0,0384	0,0015
14	-1,80	-1,80	-1,70	3	-1,767	0,0577	0,0033

MUESTRA 4

Lab N°	1	2	3	n		s	s2
1	3,37	3,51	3,29	3	3,388	0,1077	0,0116
2	3,82	3,64	4,07	3	3,845	0,2185	0,0477
3	3,67	3,98	3,92	3	3,856	0,1627	0,0265
4	3,59	3,64	3,63	3	3,620	0,0265	0,0007
5	3,71	3,78	3,74	3	3,743	0,0351	0,0012
6	3,46	3,33	3,37	3	3,387	0,0666	0,0044
7	3,30	3,36	3,42	3	3,360	0,0600	0,0036
8*	3,18	3,29	3,22	3	3,231	0,0564	0,0032
9	3,51	3,54	3,56	3	3,538	0,0260	0,0007
10	3,57	3,39	3,61	3	3,523	0,1149	0,0132
11*	2,00	1,93	2,07	3	2,000	0,0700	0,0049
12*	2,69	2,76	2,60	3	2,683	0,0802	0,0064
13	3,80	3,63	3,78	3	3,739	0,0918	0,0084
14	3,50	3,40	3,40	3	3,433	0,0577	0,0033

MUESTRA 5

Lab N°	1	2	3	n		s	s2
1	6,60	6,72	6,59	3	6,635	0,0748	0,0056
2	7,18	7,04	7,33	3	7,179	0,1445	0,0209
3	6,98	7,18	6,80	3	6,986	0,1895	0,0359
4	7,00	7,03	7,08	3	7,037	0,0404	0,0016
5	7,05	7,11	7,09	3	7,083	0,0306	0,0009
6	6,69	6,70	6,63	3	6,673	0,0379	0,0014
7	6,48	6,60	6,55	3	6,543	0,0603	0,0036
8*	6,57	6,61	6,49	3	6,553	0,0616	0,0038
9	6,96	6,92	6,90	3	6,925	0,0295	0,0009
10	6,87	6,74	6,84	3	6,816	0,0690	0,0048
11*	5,06	4,76	5,24	3	5,020	0,2425	0,0588
12*	5,87	5,61	5,29	3	5,590	0,2905	0,0844
13	7,04	6,88	6,99	3	6,970	0,0841	0,0071
14	6,90	6,60	6,70	3	6,733	0,1528	0,0233

MUESTRA 6

Lab N°	1	2	3	n		s	s2
1	-1,87	-1,79	-1,84	3	-1,831	0,0407	0,0017
2	-1,67	-1,50	-1,41	3	-1,525	0,1293	0,0167
3	-1,75	-1,68	-1,86	3	-1,762	0,0905	0,0082
4	-1,84	-1,80	-1,76	3	-1,800	0,0400	0,0016
5	-1,65	-1,65	-1,75	3	-1,683	0,0577	0,0033
6	-1,70	-1,74	-1,64	3	-1,693	0,0503	0,0025
7	-1,93	-1,85	-1,96	3	-1,913	0,0569	0,0032
8*	-3,58	-3,45	-3,11	3	-3,380	0,2449	0,0600
9	-1,84	-1,77	-1,83	3	-1,812	0,0332	0,0011
10	-1,81	-2,02	-1,79	3	-1,871	0,1300	0,0169
11*	-3,42	-2,97	-2,76	3	-3,050	0,3372	0,1137
12*	-2,39	-2,63	-2,81	3	-2,610	0,2107	0,0444
13	-1,76	-1,80	-1,76	3	-1,775	0,0241	0,0006
14	-2,00	-2,10	-1,90	3	-2,000	0,1000	0,0100

MUESTRA 7

Lab N°	1	2	3	n		s	s2
1	-1,90	-1,94	-1,95	3	-1,929	0,0229	0,0005
2	-1,94	-1,79	-1,69	3	-1,803	0,1275	0,0163
3	-2,00	-2,04	-2,22	3	-2,086	0,1199	0,0144
4	-2,08	-2,04	-1,94	3	-2,020	0,0721	0,0052
5	-1,94	-1,88	-1,91	3	-1,910	0,0300	0,0009
6	-2,07	-2,06	-2,18	3	-2,103	0,0666	0,0044
7	-2,21	-2,28	-2,19	3	-2,227	0,0473	0,0022
8"	-3,23	-3,74	-3,28	3	-3,417	0,2773	0,0769
9	-2,08	-2,06	-2,10	3	-2,081	0,0206	0,0004
10	-2,10	-2,19	-2,02	3	-2,104	0,0820	0,0067
11*	-3,55	-3,66	-3,18	3	-3,463	0,2515	0,0632
12*	-2,59	-2,86	-3,06	3	-2,837	0,2359	0,0556
13	-1,70	-2,00	-1,75	3	-1,818	0,1599	0,0256
14	-2,20	-2,40	-2,30	3	-2,300	0,1000	0,0100

MUESTRA 8

Lab N°	1	2	3	n		s	s2
1	5,80	5,96	5,93	3	5,896	0,0876	0,0077
2	6,50	6,28	6,45	3	6,410	0,1155	0,0133
3	6,02	6,20	6,07	3	6,097	0,0926	0,0086
4	5,85	6,02	5,98	3	5,950	0,0889	0,0079
5	6,04	6,15	6,20	3	6,130	0,0819	0,0067
6	5,97	6,01	5,99	3	5,990	0,0200	0,0004
7	5,88	5,89	5,93	3	5,900	0,0265	0,0007
8*	5,70	5,07	5,49	3	5,418	0,3191	0,1018
9	6,09	6,05	6,14	3	6,091	0,0458	0,0021
10	6,01	5,83	6,03	3	5,960	0,1107	0,0123
11*	4,50	4,66	4,57	3	4,577	0,0802	0,0064
12*	5,22	4,90	4,60	3	4,907	0,3101	0,0961
13	5,93	5,86	5,92	3	5,905	0,0409	0,0017
14	5,90	5,90	5,90	3	5,900	0,0000	0,0000

MUESTRA 9

Lab N°	1	2	3	n		s	s2
1	5,10	4,98	5,14	3	5,070	0,0823	0,0068
2	5,65	5,38	5,66	3	5,560	0,1603	0,0257
3	5,33	5,11	5,07	3	5,171	0,1407	0,0198
4	5,19	5,23	5,28	3	5,233	0,0451	0,0020
5	5,40	5,45	5,39	3	5,413	0,0321	0,0010
6	5,17	5,21	5,14	3	5,173	0,0351	0,0012
7	4,93	4,87	4,88	3	4,893	0,0321	0,0010
8*	4,30	4,65	4,38	3	4,441	0,1807	0,0327
9	5,00	5,19	5,02	3	5,071	0,1069	0,0114
10	5,28	5,14	5,23	3	5,215	0,0728	0,0053
11*	3,86	3,75	3,81	3	3,807	0,0551	0,0030
12*	4,71	4,14	4,10	3	4,317	0,3412	0,1164
13	5,30	5,07	5,23	3	5,197	0,1176	0,0138
14	5,10	5,20	5,00	3	5,100	0,1000	0,0100

MUESTRA 10

Lab N°	1	2	3	n		s	s2
1	-2,53	-2,68	-2,51	3	-2,571	0,0912	0,0083
2	, -2,15	-2,53	-2,22	3	-5,301	0,2019	0,0408
3	-2,55	-2,52	-2,63	3	-2,567	0,0604	0,0036
4	-2,64	-2,53	-2,52	3	-2,563	0,0666	0,0044
5	-2,20	-2,37	-2,43	3	-2,333	0,1193	0,0142
6	-2,78	-2,65	-2,75	3	-2,727	0,0681	0,0046
7	-2,75	-2,87	-2,85	3	-2,823	0,0643	0,0041
8*	-3,58	-3,40	-2,90	3	-3,295	0,3527	0,1244
9	-2,82	-2,74	-2,81	3	-2,789	0,0464	0,0022
10	-2,91	-2,76	-2,61	3	-2,761	0,1520	0,0231
11*	-3,99	-4,00	-4,02	3	-4,003	0,0153	0,0002
12*	-2,21	-2,43	-2,51	3	-2,383	0,1553	0,0241
13	-2,43	-2,60	-2,46	3	-2,498	0,0904	0,0082
14	-2,80	-2,80	-2,70	3	-2,767	0,0577	0,0033

Resumen de los resultados estadísticos